本試劑盒采用間接競(jìng)爭ELISA方法檢測(cè)大米、小米、面等谷物及飼料樣本中的嘔吐毒素(Deoxynivalenol，DON)，試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液，樣本中的嘔吐毒素和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭抗嘔吐毒素抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含嘔吐毒素含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中嘔吐毒素的殘留量。

酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟：

將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上，洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃

1、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置

2、加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘

3、洗滌：小心揭開蓋板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加350µl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干(用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)

4、顯色：每孔加入底物液A50µl，再加底物液B50µl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘(若藍(lán)色過淺，可適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間)

5、終止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)

6、測(cè)吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成